雙熒光素酶報告基因檢測

產(chǎn)品型號：

所屬分類：分子生物學(xué)實驗

產(chǎn)品時間：2024-08-30

簡要描述：[雙熒光素酶報告基因檢測]慢病毒,腺病毒，RNAI類， 分子生物實驗，病理實驗，免疫學(xué)實驗，細(xì)胞實驗，動物實驗，蛋白組學(xué)實驗，芯片類實驗，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

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雙熒光素酶報告基因檢測

實驗意義

1.可廣泛引用與miRNA的靶基因檢測，可以判斷miRNA是否與靶基因結(jié)合，也可以定量反映miRNA對目的基因的抑制作用。

2.轉(zhuǎn)錄因子(反式作用因子)存在DNA結(jié)合域，可以與靶標(biāo)啟動子中的特異序列(順式作用元件)進(jìn)行共價結(jié)合，從而調(diào)控基因的表達(dá)，雙熒光素酶報告系統(tǒng)是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子與基因特異序列的重要手段，是真核基因表達(dá)調(diào)控研究的常用方法。

實驗原理及流程

雙熒光素酶是指螢火熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火蟲熒光素酶呈黃綠色，波長550-570nm, 海腎熒光素酶呈藍(lán)色，波長為480nm。報告基因?qū)嶒炇菍袠?biāo)啟動子的特定片段插入熒光素酶表達(dá)序列的前方，構(gòu)建帶有靶標(biāo)啟動子片段的雙報道基因質(zhì)粒，然后將待測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞或者其他相關(guān)細(xì)胞系，如果轉(zhuǎn)錄因子能夠激活

啟動子，則報告基因表達(dá)，熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子作用強(qiáng)度成正比。加入熒光素酶底物即可根據(jù)熒光強(qiáng)度檢測轉(zhuǎn)錄因子與靶啟動子之間是否存在相互作用。熒光素酶報告基因可構(gòu)建在同一質(zhì)粒或者構(gòu)建為兩個質(zhì)粒，即轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒與靶啟動子片段質(zhì)粒。

實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

實驗周期: 4-6周

交付標(biāo)準(zhǔn):雙熒光素酶報告基因檢測、鑒定結(jié)果報告、分析報告、實驗報告(試劑、 耗材.實驗步驟)、原始數(shù)據(jù)等

需確認(rèn)的信息

1.基因與啟動子信息

2.具體分許信息.

3.是否提供質(zhì)粒?

參考文獻(xiàn)

[1] Miraglia E , Nylen, Frank, Johansson K，et al. Entinostat up-regulates the CAMP gene encoding LL-37 via activationof STAT3 and HIF-1a transcription factors[J]. Scientific Reports, 2016, 6:33274.

[2] Azimzadeh P，Olson J A，Balenga N . Reporter gene assays for investigating GPCR signaling.[J]. Methods Cell Biol,2017:89-99.

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