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人麻疹病毒 IgG(MV IgG)ELISA 試劑盒說明書
更新時間:2015-08-25 點擊量:803

人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯免疫分析(ELISA)


試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。


藥品名稱:


通用名:人麻疹病毒 IgG(MV IgG)酶聯免疫分析試劑盒 使用目的:


本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關組織液中麻疹病毒 IgG(MV IgG)的含量。


實驗原理


本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人麻疹病毒IgG(MVIgG)水平。用純化的人麻疹毒IgG(MV IgG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入麻疹病毒 IgG(MV IgG),再與 HRP 標記的麻疹病毒 IgG(MV IgG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標 抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并 在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的麻疹病毒 IgG(MV IgG)呈正相關。 用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人麻疹病毒IgG(MV IgG)的含量。

試劑盒組成


1

20 倍濃縮洗滌液

30ml×

7

終止液

6ml×







2

酶標試劑

6ml×

8

標準品(270 IU/L

0.5ml×







3

酶標包被板

12 孔×

9

標準品稀釋液

1.5ml×







4

樣品稀釋液

6ml×

10

說明書







5

顯色劑 A 液

6ml×

11

封板膜







6

顯色劑 B 液

6ml×1/

12

密封袋








標本處理及要求


1.血清、血漿標本可直接測定; 2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000 /分離心 10 分鐘后,取上清液待測。


3.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

操作步驟


標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別 加標準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;再各取 100μl 分 別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后,在第 三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉;再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中;再在第五、 第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加 到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、 第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl, 混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為180IU/L,120 IU/L60 IU/L,30 IU/L15 IU/L)。


加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣 品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。


配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用


洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。


加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。


溫育:操作同 3。


洗滌:操作同 5。


顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.


終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。


測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。


計算


以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數, 即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。


2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。


3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。


4請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD  大于標準品孔*孔 OD 值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。


5 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.


6.本試劑不同批號組分不得混用。


7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。


8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。


9.底物請避光保存。


檢測范圍:


10 IU/L 200 IU/L


規格:96 人份/


保存條件及有效期


1.試劑盒保存:;2-8℃。


2.有效期:個月

滬公網安備 31011802001677號

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